?生發(fā)中心激酶樣激酶抗體技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟

生發(fā)中心激酶樣激酶抗體技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：

一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。

2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。

抗體制備過程：

1.材料與試劑

a．提取的動(dòng)物 Ig

b．弗氏佐劑和弗氏不佐劑

d．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔

e．其它材料及試劑

2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。

3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。

4、試取血樣進(jìn)行測(cè)試，查看免疫效果。

5、如果免疫成功，殺死實(shí)驗(yàn)活體，采集全部血清。

6、純化出抗體。

7、鑒定抗體。胎牛血清（無菌采制）